La edición de bases utiliza una enzima desaminasa para llevar a cabo una mutación de transición, convirtiendo una base en otra base específica, sin requerir la formación de una ruptura de doble cadena (DSB) de ADN. Cuando el uso de una terapia celular no sea viable, la edición de bases podría implementarse como una terapia génica y podría abordar ~60% de las mutaciones puntuales que causan enfermedades y que constituyen la mayoría de las mutaciones patogénicas humanas. Para la terapia celular, la edición de bases es una atractiva plataforma de ingeniería genética que puede introducir ediciones precisas para corregir mutaciones de transición que causan enfermedades, o para introducir un codón stop con un alto nivel de eficiencia para prevenir la transcripción de genes y, por lo tanto, la expresión.

INGENIERÍA GENÓMICA PRECISA

Mejorando las terapias celulares

El éxito de las terapias celulares, en particular las células CAR T, se ha limitado a las células que son fáciles de extraer y devolver al paciente después de la modificación. Los tumores que involucran células sanguíneas, como la leucemia y el linfoma, han mostrado excelentes tasas de respuesta a las células CAR T; sin embargo, uno de los grandes desafíos que enfrentan las terapias celulares para tumores sólidos es la complejidad y la naturaleza inmunosupresora del microambiente tumoral. Es probable que se necesite la ingeniería genética de la célula subyacente para brindar la eficacia requerida de la terapia celular en el ambiente de tumor sólido notoriamente inmunosupresor.

Ya se han identificado muchos genes como candidatos potenciales para la inactivación o la desactivación para mejorar la eficacia general de las células CAR T y se están probando en el contexto de tumores sólidos, pero será necesario modificar varios genes simultáneamente y esta es actualmente un área desafiante.

 

Evitar el impacto negativo de las roturas de doble hélice (DSB)

Las DSB generadas por la nucleasa Cas9 son reparadas por la célula huésped utilizando una variedad de vías de reparación del ADN. Si el ADN se rompe en más de un lugar mediante la introducción de DSB en varios genes al mismo tiempo, la vía de reparación de unión de extremos no homólogos (NHEJ) podría volver a unir los extremos sueltos de forma incorrecta, lo que provocaría translocaciones cromosómicas. Si bien es probable que esto conduzca a la muerte de la célula, existe el riesgo de que la translocación pueda conferir una ventaja de proliferación o supervivencia a la célula T que podría conducir a una célula procancerosa. La imprevisibilidad de estas translocaciones significa que incluso apuntar solo a dos genes podría tener consecuencias no deseadas. Por ejemplo, apuntar a dos genes y suponer que había dos DSB fuera del objetivo daría lugar a cuatro DSB y ocho extremos de ADN que requieren reparación. Esto significa que solo hay cuatro combinaciones correctas y 36 translocaciones erróneas. Aumentar el número de genes objetivo exacerba esto exponencialmente.

La edición de base se basa en que Cas9 funciona como una nickasa, no como una nucleasa, por lo que es mucho menos probable que este enfoque produzca grandes alteraciones genéticas, como translocaciones. Esto indica que la edición de base podría ser una herramienta de elección para los knockouts de genes multiplex.

Plataforma de edición base Pin-Point™ para terapia celular y génica

La precisión de la edición de bases combinada con la ausencia de roturas de doble cadena lo convierte en un candidato ideal para su uso como tecnología de ingeniería genética terapéutica. Ver más➤ 

 

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